發(fā)布時間： 2021-06-17 點(diǎn)擊次數(shù)： 941次
當(dāng)待測
ATCC細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。
具體計數(shù)的操作如下：
1.將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板。
2.將ATCC細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。
3.計算板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計左側(cè)和上方的。然后按公式計算：
細(xì)胞數(shù)/mL=四大格細(xì)胞總數(shù)/4×104。
說明：公式中除以4，因?yàn)橛嫈?shù)了4個大格的細(xì)胞數(shù)。公式中乘以104因?yàn)橛嫈?shù)板中每一個大格的體積為：
1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）=0.1mm³，而1ml=1000mm³。
注意：鏡下偶見有兩個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個細(xì)胞計算，若細(xì)胞團(tuán)10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。
ATCC細(xì)胞計數(shù)要點(diǎn)：
1.進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)時，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于1×107 L-1，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。
2.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計數(shù)準(zhǔn)確性。
3.取樣計數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其時多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻，以求計數(shù)準(zhǔn)確。
4.數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞聚集成團(tuán)時，只按照1個細(xì)胞計算。如果細(xì)胞壓在格線上時，則只計上線，不計下線，只計右線，不計左線。
5.操作時，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計數(shù)。
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